Uobičajeni uzroci abnormalnih staničnih kultura

Često postoje ovakvi ili onakvi problemi u procesu uzgoja stanica. Nemojte podcjenjivati ​​kulturu stanica, ali ona sadrži sveučilišna pitanja. Komunicirajući s korisnicima, pronaći ćete mnoge probleme koji se mogu izbjeći. Sljedeće je uobičajeno u procesu kulture stanica. Analizirajte uzrok abnormalnosti.

petrijeva zdjelica

1. Kultivirane stanice ne prianjaju na stijenku

mogući razlog

1. Pretjerana probava tripsina;

2. Kontaminacija mikoplazmom;

3. pH vrijednost medija je previše alkalna (razgradnja NaHCO3);

4. Starenje stanica;

5. Početna koncentracija inokuliranih stanica je preniska ili previsoka.

Riješenje

1. Skratiti vrijeme probave tripsina ili smanjiti koncentraciju tripsina;

2. Izolirajte kulturu i detektirajte mikoplazmu. Očistite postolje ili inkubator. Ako se pronađe kontaminacija mikoplazmom, bacite kulturu;

3. Koristite sterilnu otopinu octene kiseline za podešavanje pH ili napunite sterilnim CO2;

4. Omogućiti nove konzervacijske ćelije;

5. Podesite optimalnu koncentraciju inokuliranih stanica.

2. Grupiranje suspenzijskih stanica

mogući razlog

1. Medij kulture sadrži ione kalcija i magnezija;

2. Kontaminacija mikoplazmom;

3. Pretjerana probava proteazom uzrokuje lizu stanica;

4. Kontaminacija DNK.

Riješenje

1. Operite stanice uravnoteženom otopinom soli bez kalcija i magnezija i lagano puhnite i usisajte

2. Stanice dobivaju jednu staničnu suspenziju;

3. Odvojiti kulturu i detektirati mikoplazmu;

4. DNasel tretman stanica.

3. Kultivirane stanice rastu sporo

mogući razlog

1. Zbog zamjene drugog medija kulture ili seruma;

2. Neke komponente potrebne za rast stanica u mediju kulture, kao što su glutamin ili faktori rasta, osiromašene su ili nedostaju ili su uništene;

3. Postoji mala količina bakterijske ili gljivične kontaminacije u kulturi;

4. Nepravilno skladištenje reagensa;

5. Početna koncentracija inokuliranih stanica je preniska;

6. Stanice su ostarjele;

7. Kontaminacija mikoplazmom.

Riješenje

1. Usporedite sastav novog medija i izvornog medija, usporedite novi serum i stari serum kako biste podržali eksperimente rasta stanica i pustite stanice da se postupno prilagode novom mediju;

2. Promijenite u svježe pripremljeni medij kulture ili dodajte glutamin i faktore rasta;

3. Koristite medij kulture bez antibiotika za kulturu, ako se ustanovi da je kontaminiran, bacite kulturu;

4. Serum treba čuvati na -10 do -20 stupnjeva. Medij kulture treba čuvati na 2-8 stupnjeva u mraku. Potpuni medij kulture koji sadrži serum treba čuvati na 2-8 stupnjeva i treba ga potrošiti unutar 1 tjedna;

5. Povećati početnu koncentraciju inokuliranih stanica;

6. Promjena u novu ćeliju za očuvanje;

7. Izolirajte kulturu i detektirajte mikoplazmu. Očistite postolje i inkubator. Ako se pronađe kontaminacija mikoplazmom, bacite kulturu.

Četvrto, kultivirane stanice slabo rastu

mogući razlog

A. Stanje same stanice

1. Broj staničnih prolaza je velik, a stanice stare;

2. Količina inokulacije stanica: premala količina inokulacije, spor rast stanica;

3. Pasaža stanica je prekasna: trovanje stanica, što utječe na rast stanica nakon pasaže;

4. Vrijeme probave tripsina je predugo ili prekratko: ako je vrijeme predugo, stanice umiru; ako je vrijeme prekratko, stanice se ne razdvoje u potpunosti u klastere i stanice umiru;

5. Krioprezervacija i obnavljanje stanica: polagano zamrzavanje i trenutna liza.

B. Onečišćenje

1. Kontaminacija mikoplazmom;

2. Kontaminacija plijesni.

C, medij kulture ili serum

1. Nema validacije prije zamjene seruma ili medija;

2. je li odabrani medij prikladan;

3. Je li srednja priprema primjerena;

4. Je li priprema medija točna.

D. kultivirati okoliš

1. Je li opskrba CO2 normalna?

2. Temperatura inkubatora ili mućkalice je pravilno kontrolirana.

Riješenje

U skladu s gornja četiri moguća razloga, napravite ciljana rješenja

1. Obratite pozornost na stanje stanica: kao što je broj prolaza, količina inokulacije itd.;

2. Izbjegavajte onečišćenje (koristite običan, legalan i sljedivi serum);

3. Koristite odgovarajući serum ili medij, po mogućnosti provjeren;

4. Obratite pozornost na laboratorijsko okruženje.

Mogući uzroci stanične smrti u kulturi

1. U inkubatoru nema CO2;

2. Temperatura u inkubatoru previše varira;

3. Stanice su oštećene tijekom krioprezervacije ili oporavka;

4. Osmotski tlak medija kulture je netočan;

5. Nakupljanje toksičnih metabolita u mediju kulture.

Riješenje

1. Detektirajte CO2 u inkubatoru;

2. Provjerite temperaturu u inkubatoru;

3. Uzmite novu sačuvanu staničnu vrstu;

4. Odrediti osmotski tlak medija kulture;

5. Promjena u svježi medij kulture;