Medij stanične kulture mora sadržavati dovoljno hranjivih tvari kako bi zadovoljio tvari i energiju potrebnu za biokemijske reakcije kao što su sinteza novih stanica i stanični metabolizam. Glavne komponente medija za kulturu stanica su voda, aminokiseline, vitamini, ugljikohidrati, anorganske soli i druge pomoćne hranjive tvari. Stoga moramo obratiti pozornost na metodu sterilizacije medija stanične kulture i povezane mjere opreza u svakodnevnim eksperimentima.
kultura stanica
1. Metode sterilizacije i mjere opreza za različite medije staničnih kultura
Metode sterilizacije medija stanične kulture dijele se na sterilizaciju autoklavom i sterilizaciju membranskom filtracijom. Različiti mediji kulture mogu imati različite metode sterilizacije zbog različitih hranjivih tvari.
Autoklav
Neki mediji, kao što je MEM, mogu se autoklavirati, ti mediji općenito ne sadrže L-glutamin i natrijev bikarbonat i općenito se dodaju nakon što je medij bio autoklaviran. Osim toga, umjesto L-glutamina može se koristiti visokotlačni glutamat (kao što je L-alanil-L-glutamin). Medij za autoklaviranje potpuno je steriliziran s minimalnim gubitkom hranjivih tvari na 121 stupanj , 15 psi i 15 minuta, bez produljenja vremena sterilizacije.
Većina medija za stanične kulture nije prikladna za autoklaviranje. Budući da medij kulture često sadrži vitamine, proteine, polipeptide, faktore rasta i druge tvari, te su tvari sklone denaturaciji ili gubitku funkcije pod utjecajem visoke temperature ili izloženosti zračenju, pa se gore navedene tekućine uglavnom filtriraju i steriliziraju kako bi se uklonile bakterije. Dostupne su mnoge filtarske membrane za filtraciju i sterilizaciju, a njihovi materijali su uglavnom PES, najlon, polikarbonat, celulozni acetat, nitroceluloza, PTFE, keramika itd. Sterilizacija membranskom filtracijom trenutno je često korištena i prikladna metoda. Često se koriste filterske membrane s veličinom pora od 0.2 μm, a neke koriste veličinom pora od 0.1 μm. U usporedbi s visokotlačnim filtriranjem, membrane imaju životni vijek i skuplje su, ali su manje destruktivne za hranjive tvari u mediju stanične kulture.
2. Mjere opreza tijekom skladištenja različitih medija za kulturu stanica
Općenito, tekući medij za kulturu stanica ne smije se zamrzavati na -20 stupnjeva jer se hranjive tvari mogu istaložiti tijekom odmrzavanja, što će utjecati na učinak kulture. Pod normalnim okolnostima, treba ga čuvati na 2 ~ 8 stupnjeva daleko od svjetlosti. Prije upotrebe izvaditi iz hladnjaka i staviti na sobnu temperaturu da se uravnoteži. Uobičajeni tekući medij vrijedi 6 do 12 mjeseci. Pokušajte izbjeći dugotrajno skladištenje tekućeg medija za kulturu stanica. Glutamin u njemu će se polako razgraditi s produljenjem vremena skladištenja. Ako rast stanica nije dobar, možete razmotriti testiranje sadržaja glutamina u mediju kako biste utvrdili treba li dodati glutamin. . Komercijalno dostupan tekući medij za kulturu stanica ima određeni rok valjanosti. Nakon korištenja medija za staničnu kulturu u obliku suhog praška za pripremu tekućine, treba ga također čuvati na niskoj temperaturi (2 ~ 8 stupnjeva). Uz laku razgradnju glutamina u mediju, druge komponente u mediju također se mogu razgraditi ili istaložiti s povećanjem temperature.
