PCR detekcija
Polimerazna lančana reakcija (PCR) koristi dio DNA kao šablonu, a uz sudjelovanje DNA polimeraze i nukleotidnog supstrata, DNK se umnožava na količinu dovoljnu za strukturnu i funkcionalnu analizu. Metoda PCR detekcije ima izuzetno važno značenje u kliničkoj brzoj dijagnostici bakterijskih zaraznih bolesti.
Princip PCR-a koristi se za amplificiranje fragmenta DNA koji se nalazi između dvije poznate sekvence, slično procesu replikacije prirodne DNA. Molekula DNA koja se amplificira koristi se kao šablona, a par oligonukleotidnih fragmenata komplementarnih 5'kraju i 3'kraju predloška se koristi kao početni. Pod djelovanjem DNA polimeraze slijedi šablon prema polurezerviranom mehanizmu replikacije. Produženje lanca do završetka nove sinteze DNA, ponovite ovaj proces, ciljni DNA fragment se može pojačati.
(PCR) je metoda za enzimatsku sintezu specifičnih fragmenata DNA in vitro. Sastoji se od nekoliko koraka visokotemperaturne denaturacije, niskotemperaturnog žarenja i odgovarajuće temperaturne ekstenzije. Značajke kao što su visoka osjetljivost, jednostavan rad i ušteda vremena. Može se koristiti ne samo u osnovnim istraživanjima kao što su izolacija gena, kloniranje i analiza sekvencije nukleinskih kiselina, već i u dijagnostici bolesti ili bilo kojeg mjesta gdje postoje DNA i RNA. Lančana reakcija polimeraze (Polymerase Chain Reaction, skraćeno PCR) također je poznata kao molekularno kloniranje bez stanica ili specifična DNA sekvenca in vitro enzimske tehnologije amplifikacije usmjerene na prajmer.
Polu-rezervirana replikacija DNK važan je način za biološku evoluciju i prolazak. Dvolančana DNK može se denaturirati i rastopiti u jednu lancu pod djelovanjem raznih enzima. Uz sudjelovanje DNA polimeraze i promotora, dvolančana DNA se može replicirati u iste dvije molekule prema principu komplementarnog uparivanja baza. U pokusima je utvrđeno da se DNK može denaturirati i otopiti na visokim temperaturama, a pri snižavanju temperature može se ponovno renaturirati u dvostruke niti. Stoga, kontroliranjem denaturacije i renaturacije DNA kroz temperaturne promjene i dizajniranjem primera kao promotora, dodavanjem DNA polimeraze i dNTP-a može se dovršiti in vitro replikacija specifičnih gena.
Jednostavna stvar je korištenje posebne opreme, korištenje dNTPS, Mg2+, specifičnih primera, DNA polimeraze i puferskog sustava, dodavanje šablona, koji je uzorak DNK za in vitro amplifikaciju, i izvođenje elektroforeze. Ako se može pojačati, a veličina pojačanog proizvoda je u skladu s ciljnom trakom, to znači da su temeljni premaz i predložak specifični, a indeks detekcije pozitivan.
Metode i koraci detekcije PCR nukleinske kiseline
Testiranje nukleinske kiseline zahtijeva pet koraka: uzorkovanje, zadržavanje uzorka, zadržavanje, ekstrakcija nukleinske kiseline i kompjutersko testiranje.
Detekcija nukleinske kiseline
Prvi korak je sakupljanje ljudskog izlučevina i brisanje nosne šupljine ili stražnje stijenke ždrijela i obostranih ždrijelnih tonzila nazalnim testom ili testom ždrijela.
U drugom koraku, medicinsko osoblje je zadržalo uzorak, uronilo glavu uzorka u otopinu za konzerviranje stanica i zašrafilo čep epruvete odmah nakon lomljenja repa.
U trećem dijelu uzorak staviti u hermetičku vrećicu, čuvati i na vrijeme poslati na pregled.
Četvrti korak je slanje uzorka u laboratorij za ekstrakciju nukleinske kiseline.
U petom koraku, ekstrakt je podvrgnut reakciji fluorescentne PCR amplifikacije.
Također je potreban neki potrošni materijal i instrumenti
PCR instrument, PCR cijev, vrh pipete, ploča za duboku jažicu, rezervoar i reagensi dodani
