proces kulture stanica sisavaca
Stanice sisavaca prolaze kroz proces ekstrakcije tkiva, primarne kulture i subkulture. Subkultura se može podijeliti na kulturu stanične linije i kulturu stanične linije prema uvjetima. Svaki proces je ukratko opisan na sljedeći način:
Primarna kultura: Nakon uklanjanja tkiva sa životinje, on se usitnjava, liječi različitim enzimima (obično tripsinom), kelatnim sredstvima (obično EDTA) i mehaničkim metodama (ponovljena aspiracija i puhanje pipeta), a zatim se raspršuje u pojedinačne stanice, Kultivira u odgovarajućem mediju koji omogućuje stanicama da prežive, rastu i razmnožavaju se. Primarna kultura stanica općenito se odnosi na staničnu kulturu unutar 10 odlomaka nakon uklanjanja stanica iz životinje.
Nakon primarne kulture stanica, diobe stanica i reprodukcije, kultura se postupno povećava, rast ispunjava prostor kulture, a zatim međusobno kontaktira, što rezultira inhibicijom kontakta, a stopa rasta postupno usporava ili čak prestaje. Treba ga ponovno zasijati u nove kulturne tikvice za subkulturu.
Prolazak (prolaz): Primarne stanice se izvlače iz tikvice kulture, priprema se suspenzija stanica i dijeli se u dvije ili više tikvica kulture za daljnju kulturu, koja se naziva subkultura.
Linija ćelije: Linija ćelije je linija ćelije nakon prvog prolaza u primarnoj kulturi. Ako je vrijeme preživljavanja stanične linije ograničeno, to se naziva konačna stanična linija. Stanična linija koja dobiva neograničenu reproduktivnu sposobnost i nastavlja preživljavati naziva se kontinuirana stanična linija ili beskonačna stanična linija.
Linija stanica: Iz biološki identificiranih staničnih linija, populacija stanica formirana izolacijom, kulturom ili probirom jednostaničnih stanica naziva se stanična linija. Stanične populacije različitih oblika zatim se izoliraju i kultiviraju iz primarne stanične linije kako bi se stvorile subklone.
Uvjeti kulture stanica sisavaca
Različite stanice sisavaca zahtijevaju osnovne uvjete kulture u svakoj fazi
1. Sterilno i netoksično okruženje: aseptička obrada kulturnog medija i sve opreme za kulturu; dodavanje antibiotika u medij kulture kako bi se spriječila kontaminacija tijekom procesa kulture; redovita zamjena medija kulture za uklanjanje metabolita kako bi se spriječilo oštećenje kultiviranih stanica.
2. Prehrana: Tekući sintetički medij sadrži šećere, aminokiseline, čimbenike koji potiču rast, vodu, anorganske soli, elemente u tragovima itd. Obično je potrebno dodati prirodne komponente kao što su plazma i serum
3. Prikladna temperatura i pH vrijednost: Optimalna temperatura za ljudske i sisavske stanice je 36±0,5 °C. Prikladna pH vrijednost je 7,2-7,4.
4. Plinsko okruženje: Plinsko okruženje je općenito "95% zraka + 5% ugljičnog dioksida" miješani plin. Kisik je plin potreban za stanični metabolizam, a ugljični dioksid održava pH medija.
