Lančana reakcija polimerazom (PCR) jedna je od najpoznatijih metoda u laboratorijima za znanost o životu.
PCR ploče izrađene su od prvoklasne plastike za izvrsno rukovanje i analizu prikupljenih uzoraka ili rezultata.
Imaju tanke, ujednačene stijenke koje omogućuju precizan prijenos topline.
U pripremi za primjenu u stvarnom vremenu, male frakcije DNA ili RNA se izoliraju i pohranjuju u PCR ploče.
PCR ploče su vrlo učinkovite u toplinskom zatvaranju i također ograničavaju protok topline.
Međutim, budući da su PCR ploče učinkovite i pouzdane, sklone su pogreškama i netočnostima prilikom obrade uzoraka.
Dakle, ako ste zainteresirani za nabavku kvalitetnih PCR ploča. Najbolje je kontaktirati pouzdanog proizvođača PCR ploča. Uz to možete biti sigurni da ćete dobiti najbolju cijenu.
Dolje su navedene neke mjere opreza za izbjegavanje kontaminacije reagensa ili uzoraka i za sprječavanje netočnih rezultata.
Dezinficirajte okolinu
Netočni pozitivni ili negativni rezultati zbog prisutnosti nečistoća mogu izazvati sumnju u rezultate.
Nečistoće i kontaminanti dolaze u različitim oblicima, kao što su nepovezani DNA ili kemijski dodaci, koji u konačnici smanjuju učinkovitost i djelotvornost reakcije.
Postoji mnogo načina za značajno smanjenje stope kontaminacije PCR ploča.
Korištenje steriliziranih vrhova filtera još je jedan koristan način za sprječavanje ulaska nečistoća u uzorak kroz pipetu.
Potpuno čist komplet opreme, uključujući pipete i stalak, osiguran je posebno za PCR upotrebu. To će jamčiti zanemariv prijenos nečistoća ili kontaminanata po laboratoriju.
Koristite izbjeljivač, etanol na pipetama, policama i stolovima kako biste obrisali onečišćenje.
Dodijelite rezervirani prostor za sve PCR reakcije kako biste dodatno smanjili kontaminaciju česticama.
Koristite čiste rukavice na svakom koraku i često ih mijenjajte.
PCR ploča
Provjerite koncentraciju i čistoću šablone.
Potrebno je održavati čistoću stolova i opreme koja se koristi za analizu uzoraka pomoću PCR-a. Prije analize i obrade ključno je provjeriti čistoću uzoraka.
Tipično, analizator uzima u obzir koncentraciju i razinu čistoće DNK uzorka.
Omjer apsorbancije od 260nm/280nm ne smije biti manji od 1,8. Nečistoće su zatim identificirane pomoću valnih duljina između 230 nm i 320 nm.
U jednom primjeru, kaotropne soli i drugi organski spojevi otkriveni su pri apsorbanciji od 230 nm. Istovremeno otkrijte i provjerite zamućenost u uzorcima DNK pri apsorbanciji na 320 nm.
Izbjegavajte pretrpavanje PCR ploča i proizvoda
Iako je poželjno koristiti više proizvoda u isto vrijeme, to može dovesti do unakrsne kontaminacije PCR ploča.
Pretrpavanje PCR ploča s različitim proizvodima je rasipanje i otežava identifikaciju uzoraka.
Vodite evidenciju o alikvotima PCR reagensa
Kontinuirani ciklusi zamrzavanja/odmrzavanja i česta uporaba alikvota mogu oštetiti PCR reagense, enzime i DNTP rekristalizacijom.
Uvijek nastojte pratiti stopu alikvota korištenih prilikom pripreme uzoraka za analizu.
Preferirani LIMS prikladniji je za kontrolu zaliha i količina reagensa i uzoraka koje treba zamrznuti ili odmrznuti.
Odaberite optimalnu temperaturu žarenja.
Odabir i korištenje pogrešne temperature žarenja još je jedan način na koji rezultati PCR-a sadrže pogreške.
Ponekad odgovor ne ide prema planu. Temperaturu žarenja treba sniziti kako bi se pospješila uspješna reakcija.
Međutim, snižavanje temperature povećava mogućnost lažno pozitivnih rezultata i početnih dimera.
Kada koristite PCR ploče, važno je potvrditi analizu krivulje taljenja jer je ona dobar pokazatelj za odabir točne temperature žarenja.
Softver za dizajn temeljnog premaza pomaže u dizajnu, pružajući točnu temperaturu žarenja, izravno smanjujući pogreške u PCR pločama.
pcr ploča
